Brucella ანტისხეულების ელიზას ნაკრები

დაზუსტება

 

ტესტის პროცედურები და ინტერპრეტაცია

 

ნაბიჯი 1 ტესტის პროცედურა

1.1 სარეცხი ხსნარის მომზადება

Wორკინგის კონცენტრაცია wსითხე:გამოყენებამდე, სარეცხი ხსნარი უნდა აღდგეს ოთახის ტემპერატურაზე (20-25 ხარისხი) და თანაბრად შეანჯღრიეთ, რომ იგი ერთგვაროვანია ., შემდეგ განზავდეს 20 -ჯერ კონცენტრირებული სარეცხი ხსნარი გაწმენდილი წყლით (მაგალითად, 5ml კონცენტრირებული სარეცხი ხსნარი ემატება 95ml გაწმენდილი წყლით), კარგად შეინახეთ სითხე. დღეები .

1.2 ნიმუშის მომზადება

①whole ცხოველის სისხლი მიიღეს, ცენტრიფუგირებულ იქნა 4000rpm– ზე 10 წუთის განმავლობაში, ხოლო supernatant შეგროვდა . შრატში ასევე შესაძლებელია კოაგულაცია ბუნებრივად ჰემოლიზის გარეშე .

② როდესაც ნიმუშის ზომა დიდია, იმისათვის, რომ უზრუნველყოს ექსპერიმენტული რეაქციის დრო თანმიმდევრული . შეურიეთ შრატის ნიმუშს ანტისხეულების სამუშაო ხსნართან 1: 1 -ში განზავების ფირფიტაში (70UL შრატის ნიმუში + 70 ul ul ანტისხეულების მუშაობის ხსნარი) . უარყოფითი კონტროლი და 6

1.3 ტესტის პროცედურა

①Take the enzyme label Microplate (according to the number of samples, can be disassembled and used several times), set up two wells each for negative and positive controls, add 100ul of the the premixed mixture to the enzyme label Microplate. Gently shake the sample in the well, using the sealing plate film to cover the plate, and incubate at 37℃for 30 წუთი .

② გახსენით დალუქვის ფირფიტის ფილმი, კარგად ჩამოიბანეთ ხსნარი ფირფიტაში კარგად, დაამატეთ 300 μl სამუშაო კონცენტრაციის სარეცხი სითხე თითოეულ ჭაბურღილზე, შემდეგ კი გადაიტანეთ სითხე ჭაბურღილში . გაიმეორეთ ზემოთ მოცემული ნაბიჯები 5 ჯერ, და ბოლოს დაასხით სუფთა შთამნთქმელი ქაღალდზე .

③Diluted ფერმენტი კონიუგატი:განზავდეს ფერმენტის კონიუგატი (50 ×) 50 ჯერ (მაგალითად: 20UL ფერმენტის კონიუგატის კონცენტრატი + 980 ul Ul Uluent 1, საჭირო სპეციფიკური თანხა გამოითვლება ტესტის ნიმუშების რაოდენობის მიხედვით), კარგად აურიეთ და დააწესეთ თავი {.

④add 100 μl ფერმენტის კონიუგატი თითოეულ ჭაბურღილზე, დაფარეთ ფირფიტა და ინკუბაცია 37 გრადუსზე 30 წუთის განმავლობაში.

⑤ Washing ფერმენტის ფირფიტა, სპეციფიკური ოპერაცია იგივეა, რაც ზემოთ მოყვანილი ② .

⑥add 100 μl სუბსტრატის ხსნარი თითოეული ჭაბურღისთვის, დაფარეთ ფირფიტა და ინკუბაცია 10 წუთის განმავლობაში 37 გრადუსზე დაშორებით შუქისგან {{3}

⑦add 50μl შეჩერების გადაწყვეტა თითოეულ ჭაბურღილზე და განსაზღვრეთ შედეგი 5 წუთში .

 

ნაბიჯი 2 შედეგის ინტერპრეტაცია

 

თითოეული ჭაბურღილის OD450 მნიშვნელობა წაიკითხა 96- კარგად მიკროპლატის მკითხველზე .

2.1 დამოწმება

 

პოზიტიური კონტროლის საშუალო OD450NM მნიშვნელობა იყო <0 . 35 და უარყოფითი კონტროლის/პოზიტიური კონტროლის საშუალო OD450NM მნიშვნელობა უფრო მეტი იყო ან ტოლი 3 . 5, ექსპერიმენტული შედეგები მართებული იყო. წინააღმდეგ შემთხვევაში, ტესტი უნდა განმეორდეს.

2.2 გაანგარიშების მეთოდი

თითოეული ნიმუშისთვის, გამოთვალეთ PI (ბლოკინგრი ჭამა) შემდეგნაირად გამოსწორებული ნიმუშისა და კონტროლის მნიშვნელობების გამოყენებით:

2.3 შედეგის ინტერპრეტაცია

როდესაც pi <20%, იგი შეფასებულია როგორც უარყოფითი .

როდესაც pi> 30%, იგი მსჯელობს როგორც პოზიტიური .

როდესაც PI– ზე ნაკლები ან ტოლი 20% –ით ნაკლები ან ტოლია 30%, ის განიხილება, როგორც საეჭვო, და გირჩევთ გაიმეოროთ შერჩევა და ტესტირება ერთი კვირის შემდეგ .

ცხელი ტეგები: Brucella Antibody Elisa Kit, China Brucella Antibody Elisa Kit მომწოდებლები, მწარმოებლები, ქარხანა